Cromatografía
Fundamento de la técnica
La cromatografía es un método físico de separación, en el cual, los componentes que se van a separar en una mezcla, se distribuyen o particionan entre dos fases inmiscibles, generalmente, una sólida (fase estacionaria) y otra líquida (fase móvil), a través de fenómenos de afinidad química o de tamizaje molecular.
Clasificación de la cromatografía
Técnicas cromatográficas
- Cromatografía en Papel: Usa papel como fase estacionaria y un solvente como fase móvil. Se utiliza comúnmente para la separación de pigmentos y análisis de aminoácidos.
Cromatografía de Capa Fina (TLC): Similar a la cromatografía en papel, pero usa una capa delgada de adsorbente (como gel de sílice) sobre una placa de vidrio, metal o plástico.
Cromatografía de Columna: Implica una columna llena de un adsorbente sólido (fase estacionaria) a través del cual se pasa una solución (fase móvil).
Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC): Usa una fase móvil líquida a alta presión y una columna con un adsorbente finamente dividido. Es muy precisa y se usa en análisis cuantitativos.
Cromatografía de Gases (GC): Utiliza un gas como fase móvil y una columna con una fase estacionaria líquida o sólida. Es ideal para separar y analizar compuestos volátiles.
Cromatografía de gases
En la cromatografía de gases, los componentes de una muestra vaporizada se separan al ser distribuidos entre una fase móvil gaseosa y una fase estacionaria liquida o sólida retenida en una columna. Al realizar una separación por cromatografía de gases, la muestra es vaporizada e inyectada en la parte superior de una columna cromatográfica. La elución ocurre por el flujo de una fase móvil inerte gaseosa. En contraste con la mayoría de los tipos de cromatográfica. La fase móvil no interactúa con las moléculas del analito. La única función de la fase móvil es transportar al analito a través de la columna.
Existen dos tipos de cromatografía de gases, Cromatografía gas-liquido y cromatografía gas-sólido. La cromatografía gas-liquido se utiliza ampliamente en todos los campos de la ciencia. La cromatografía gas-sólido.
Principios de la cromatografía
Fase Estacionaria: Es una fase inmóvil que puede ser un sólido o un líquido soportado en un sólido. Ejemplos incluyen geles de sílice, papel o fases líquidas sobre un soporte sólido.
Fase Móvil: Es una fase que se mueve a través de la fase estacionaria y puede ser un líquido (cromatografía líquida) o un gas (cromatografía de gases).
Interacción de los Componentes: Los diferentes componentes de la mezcla tienen diferentes afinidades por la fase estacionaria y la fase móvil, lo que causa que se muevan a diferentes velocidades y, por lo tanto, se separen.

Inyector
Split:
- Relación entre la cantidad de la muestra que se descarta por la válvula y lo que llega a la columna
Splitless:
- La válvula es cerrada, toda la muestra llega a la columna
Horno
- enfriamiento rápido
Temperatura Isotérmica: Rango de ebullición estrechos
Temperatura Programada: Rangos amplios de ebullición
Detector
Parámetros
Tiempo de retención
Tiempo que tarda el analito desde el punto de inyección hasta el detector.
(TR)
Factor de capacidad
Relación entre el tiempo de retención ajustado y el tiempo muerto. Indica la capacidad del sistema para separar los componentes de la mezcla.
(K')

Tiempo muerto
Tiempo desde que se inyecta hasta que se detecta. Este no debe generar ninguna interacción
(TM)
Factor coleo
Se mide al 5% de la altura del pico.
(Tailing-T)
Factor de asimetría
Se mide al 10% de la altura del pico.
As
Resolución
Permite medir la capacidad que tiene el sistema para separar de forma cuantitativa dos o más componentes en una mezcla
(R)

EJEMPLOS
2. El factor de separación es una medida de cuán bien dos compuestos están separados en una cromatografía. Se calcula como la diferencia entre las retenciones de dos compuestos dividida por la desviación estándar de las retenciones. Por ejemplo, si el compuesto A tiene una retención de 5 minutos y el compuesto B tiene una retención de 10 minutos, y la desviación estándar es 1 minuto, entonces α = (10 - 5) / 1 = 5
3. Cuando se analizó una disolución de 10,0 mL que contenía 234 mg de pentanol(PF= 88,15) y 237 mg de 2,3-dimetil-2-butanol (PF= 102,17), la relación de áreas de los picos de pentanol: 2,3-dimetil-2-butanol fue de 0,913:1,00. Suponiendo que el pentanol es el patrón interno
Calcular:
(a)hallar el factor de respuesta del 2,3-dimetil-2-butanol.
(b)Teniendo en cuenta los cromatogramas para el pentanol y 2,3-dimetil-2-butanol sus W1/2son respectivamente 2,2 y 1,5 minutos (las alturas de los picos son 41,4 y 76,0 mm)respectivamente , calcular las áreas de sus picos (teniendo en cuenta que se asemejan a un pico gausiano) es igual a 1,064*altura de pico*W1/2.
Solución:
(a)Área de 2,3-dimetil-2-butanol/[2,3-dimetil-2-butanol] = F*Área de Pentanol/[Pentanol]1,0/(237/10) = F*0,913/(234/10)F = 1,081
(b) Área butanol = 1,064*41,4*2,2 = 96,91 mm*min Área de 2,3-dimetil-2-butanol = 1,064*76,0*1,5 = 121,3 mm*min